1、配制0.9% 盐水
称9克氯化钠放入盐水瓶,加蒸馏水达1000mL,紧塞瓶口后,放进蒸锅消毒,开水蒸煮30分钟,冷却后即可使用。0.9%等渗生理盐水是用来清洗各类与精液直接接触的器皿。此盐水的浓度与精液渗透压相近,不会引起精虫的死亡,如用蒸馏水,将使精虫致死。
2、玫瑰红染色液配制
称3克玫瑰红,加入99mL蒸馏水,用玻璃棒搅匀后,再加1mL40%福尔马林。此稀释剂用于对精虫进行染色,以便于检查异常的精子。
3、稀释液配制
精液稀释液是与新鲜精液渗透压接近,用于扩大精液容量,给精子提供营养、中和精子代谢产物、保持精液PH值的生理溶液。
4、采精量测定
按照规范的采精操作,公猪的采精量一般在100~500mL,平均220mL。每头公猪的采精量应相对比较稳定。如果公猪的采精量超出正常范围, 或与以往采精量明显不同,应注意查找原因。公猪精液的比重约为1.02克/mL,接近于1,因此,适合用称重的方法来测量采精量。每克重量精液的体积约为1mL。
5、精液稀释与保存
(1) 精液的稀释
精液稀释时,一定要强调原精液与稀释液的温度要尽量一致,温度相差在2℃以内。根据计算所得的稀释后总精液体积,缓缓加入稀释液,稀释液加入应沿着杯壁倒入,禁止将稀释液从高处倒入,形成冲击力。稀释液的zui终加入量应使精液和稀释液的总体积达到所计算的稀释后体积(或重量)。加入稀释液过程中,应一边加入稀释液,一边轻轻摇动烧杯或用洁净的玻璃棒搅拌。
(2) 精液的分装
精液稀释5分钟后,应再一次检查精子活力,如果活力没有下降,方可进行分装。调好精液分装机,以每80~100mL为单位,将精液分装至精液瓶或袋。实验室室温zui好控制在20~25℃,以免在精液稀释分装处理过程中, 精液受到环境温度的影响。空气中的氧气不利于精子的保存,因此,精液封装时应尽可能将其中存留的空气排出。
精液瓶在拧上盖子时,先将瓶盖旋大半圈左右,然后挤压瓶体使精液液面上升至瓶口,再旋紧,以排出瓶中空气。袋装精液在封口时,也应先将其中的空气挤压,使精液面上升到接近封口处的高度,再用热封口机热封。
(3) 精液的保存
A、保存温度:稀释好的精液应保存在有报警装置的电子恒温箱中,恒温箱内温度保持在16~18℃;
B、每隔12个小时轻轻翻动一次,防止精子沉淀而引起死亡;
C、稀释的精液可在保温箱内保存约3天。超过3天的精液,质量将开始下降,不能用于人工授精;
D、输精前作精液检查:向试管倒入1~2mL精液,把试管放在37~38℃的恒温水浴箱中加温5分钟,取出精液轻轻摇匀,用已灭菌的滴管取1滴放于预热的载玻片,置于37℃的恒温板上片刻,用显微镜检查活力,精液活力≥ 0.7,方可使用。
6、精液的运输
精液运输应置于保温箱内,保持在16~18℃,运输过程中避免强烈震动。