猪场消毒效果如何，需要通过洗消程序评估来判断！
一 、洗消程序评估的价值与难点
3.平行试验设计
(1)通过检测筛选阳性污染场，检测阳性后开展评估实验;
(2)将20头份的伪狂犬疫苗毒(107.5TCID50)稀释为200毫升;
(3)通过刷涂和喷雾制备栏舍内栏杆、墙面和地面的污染区;
(4)静止2h干燥(每20头份的疫苗毒可制备10平米的污染区)
(5)洗消前，用拖布或棉布条对猪舍相关区域进行采样保存;
(6)用对非瘟有效的消毒剂和洗消程序对猪舍进行全面洗消;
(7)洗消后，用拖布或棉布条对猪舍相关区域进行采样保存;
(8)用荧光定量PCR检测方法，分别检测伪狂犬疫苗毒和ASFV。
二、以病毒感染细胞实验为基础的评估模型的建立
1、毒株和细胞系选择：
⚫ PRV分离株(SZ1602)：107.5~8.0TCID50/0.1mL;PK-15 细胞系;
⚫ PRRSV疫苗株(R98)：106.5~7.0TCID50/0.1mL;Marc-145细胞系;
2、实验基本流程：
病毒与消毒剂混合→感作一定时间→加入针对消毒剂的中和剂→按测定毒价的方法倍比稀释，接种细胞→观察细胞病变，与阳性对照比较毒价变化→通过PCR确认
3、结果判定：
病毒灭活率=(消毒前病毒滴度-消毒后病毒滴度)/消毒前病毒滴度*100%以病毒灭活率超过为99.99%以上做为有效的标准。
三、以病毒感染小鼠为基础的评估模型的建立
1、毒株和小鼠的选择：
⚫ PRV分离株(SZ1602)：107.5~8.0TCID50/0.1mL; 18~22g SPF昆明雌鼠;
2、攻毒模型的建立：
①将49只小鼠平均分为7组(6组做为攻毒组，剩余为阴性对照)
②将107.6 TCID50/0.1mL的伪狂犬病毒液倍比稀释为六个梯度
③对其中6个实验组进行攻毒，对照组注射100uL PBS缓冲液
注：攻毒剂量为100uL，攻毒途径为腹腔注射
④连续观察记录10天，计算死亡率并通过PCR确诊死亡原因
四、多维度影响因素的评估方法
zui大稀释浓度：
⚫消毒剂倍比稀释后，与病毒液感作时间30min;
zui小作用时间：
⚫以适当浓度稀释消毒剂，分别与病毒液感5min，10min，15min，20min，25min，加中和剂终止反应;
干扰物的影响：
⚫病毒液先与干扰物混合，再以适当浓度稀释的消毒剂与病毒液感作30min;
◼干扰物选择：
①植物油(终浓度占比20%);②牛奶(终浓度占比20%) ;③血清(终浓度占比20%);
◼还可以针对水质、PH值、温度等进行评价(待续)
三、对消毒剂评估的阶段性结果
四、消毒剂应用价值分析和总结
